原代细胞、免疫细胞难转染？为什么很多客户会考虑细胞电转仪

在进行常规细胞系转染的时候，很多实验室已经形成了比较成熟的方案。

但是当研究对象换成了原代细胞、免疫细胞或者其它比较难以转化的细胞时，情况就会发生变化。

原来的实验方法效果降低，条件摸索的时间变长了，实验人员开始寻找新的技术方案。这也是很多客户开始接触细胞电转仪的原因。

“难转染"为什么就成了实验中的一大难题呢？

对科研人员来说，最头疼的事情并不是做一次实验就失败了，而是一个实验的方法一直不能够稳定的建立起来。

特别是那些稀有的原始细胞样本，在采集的过程中就耗费了大量的时间与金钱。每次实验都必须用到很多细胞来进行条件摸索的话，整个课题的研究进度就会受到干扰。

很多客户在询问细胞电转仪的时候，都会提到类似的情况：

常规转染的方法已经做过实验了，但是效果并不好；

实验材料很宝贵，希望尽量避免多次尝试错误；

要引入某种特定的核酸分子；

要考虑到以后的细胞培养或者功能实验；

课题组之前没有类似的经验，希望能够得到一些帮助来建立最初的条件。

对于这样的需求来说，设备本身当然很重要，但是更重要的还是有没有适合这个细胞的应用思路。

二、为什么细胞电转会成为一种备选方案？

细胞电转主要是用电脉冲来暂时改变细胞膜的通透性，从而为目标分子进入细胞创造条件。

相比一些依靠细胞内自身摄取方式的方法而言，电转提供了一种另外的分子递送思路，在很多细胞的研究场景下都受到了重视。

但是要说明的是：

“可以做电转"并不等同于“不需要优化"。

不同的细胞对于电脉冲的耐受能力是不一样的，不同的实验对于结果的要求也是不一样的。

有的课题会先考虑阳性的比例，而有的课题则更注重电转之后的细胞恢复以及后续的功能。

所以在做实验的时候，要根据具体的科研目的来调节。

三、选择细胞电转仪，最好是自己体内的细胞来提问

如果是研究比较特殊的一种细胞的话，在选择型号的时候最有价值的问题并不是：

你们设备的最大电压是多大？"

而是：

我们的这个细胞是不是也做过类似的用途呢？"

没有一样的案例，有没有相似的细胞来借鉴呢？"

第一次测试建议设置几个条件？"

当细胞的状态变差之后，接下来应该先改善哪一方面的情况呢？"

“我这个样本很宝贵，可以先用少量的细胞做条件筛选吗？""

这些情况更加贴近实际的实验，并且也容易去评价一个供应商的技术支持能力。

四、对于珍贵样本，减少盲目试错更加重要

原代细胞实验中存在一个实际的问题，那就是样本费用。

相比于能够不断培养扩增的常规细胞系而言，部分原代样本的数量比较少，在进行每次条件筛选的时候都会消耗大量的细胞，这样就会给实验人员带来很大的压力。

所以在正式进行实验之前，可以先和细胞电转仪的技术人员沟通，尽量弄清楚：

实验目标；

优先评价指标；

计划检测时间；

可以用来进行优化的细胞数目；

估计一次处理的样本数量。

这样做并不是为了达到“一次成功"的效果，而是尽可能地使每次实验都具有明确的目的。

第一轮主要是确定大致适用范围，第二轮再进一步比较转染效果和细胞状态。

与无目的地不断修改参数相比，这样一种方式更能帮助我们建立起自己的实验流程。

五、科研客户的真正需求是有一套可以重复使用的办法

购买了细胞电转仪之后，最后使用的设备应该为具体的课题服务。

有一次实验意外地得到了比较好的结果，但是下次就无法再得到同样的结果了，这样的结果对于长期从事科研工作的人的价值仍然不大。

因此，在选择细胞电转仪以及进行实验优化的时候，可以同时考虑到以下几点：

操作流程是否可以被标准化；

参数是否好记、好用；

不同的人员在操作的时候会不会很容易地保持一致；

耗材供应是否稳定；

之后换上其他类型的细胞的时候是不是可以继续扩展它的应用范围。

对于科研平台或者要同时为几个课题组服务的实验室来说，这些问题就更加重要了。

六、正在做难转染细胞，可以先咨询后测试

如果目前正在进行原代细胞、免疫细胞等比较难以转染的细胞的工作，并且正在寻找一个合适的细胞电转方案的话，那么可以把具体的实验需求整理一下。

在进行咨询的时候可以直接说明：

细胞名称+样本来源+目的分子+目前的方法+目前的结果+最希望得到改进的指标。

例如：

现在正在做原代免疫细胞，希望能够导入mRNA，但是现有的方法阳性率不固定，另外也希望尽量保持后续细胞的状态。"

这样描述的方式可以使得技术员们更容易地去理解需求，并且能够判断出应该从设备选型、参数设置还是整个实验流程入手。

不如在购买设备之前把实验的问题说清楚。

如果有的细胞正在进行转染，请直接提供细胞名称和实验目的，询问细胞电转仪的应用方案以及最初的测试思路。