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对于综合性生命科学实验室来说,仪器采购经常会遇到这样一个实际的问题:设备越是专业,它的适用范围就会越小;设备越是通用,就害怕实验的效果不好。特别是电转染实验中,各个样本之间的差别很大。细菌、酵母、哺乳动物细胞、植物细胞以及植物原生质体,不管从细胞结构、膜性质还是对电脉冲的耐受能力来看,都会有很大的不同。因此,在我们决定购买电转染仪的时候,下面这个问题就显得非常重要了:设备是否可以随着研究的方向而改变继续使用,而不只是用来解决目前一种实验的问题?多样本实验室对于设备的要求要高一...
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随着CRISPR基因编辑、RNA研究、细胞治疗和蛋白功能的研究不断进步,实验室对外源分子递送技术的需求也在发生变化。以前我们更多的关注的是这样一个问题:能不能把东西送到细胞里去?”而现在我们一般还要继续追问:每次能不能稳定地送进去呢?”不同批次之间是否有可比性?”“如果实验出现异常情况的话,可以找出其中的原因吗?””因此,在越来越多有关基因编辑、细胞功能的研究项目的进行当中,电转染设备的重复性和数据记录能力变得越来越重要。##由单一的实验走向项目的开展,实验的标准也要随之改变...
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做过原代细胞、干细胞或者其它难转染细胞实验的人,一般都会遇到这样一个很实际的问题:理论上有很多转染的方法,但是能够同时保证转染效率和细胞状态的方案并不是很容易找到。特别是当研究进入到基因编辑、RNA的功能研究、细胞的功能验证等等阶段的时候,我们所关心的已经不是“外源分子是否进入了细胞”了,而是在于进入之后,这批细胞是否还处于良好的状态来完成后面的实验。转染效率很高,并不代表该实验一定会成功对一个细胞转染的过程进行评价的时候,至少要同时考虑两个方面的内容:第一是外源分子导入效率...
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在细胞生物学、分子生物学和基因功能的研究中,转染常常是实验流程中的一个看似简单的步骤,但是它又会对后续的结果产生影响。对于长期进行细胞实验的研究人员来说,令他们头疼的并不是“这次转染效率低”这样的问题,而是在于同一个实验条件,在不同的批次之间会出现明显的差异:相同的细胞、相近的培养状态、同样的核酸浓度,在不同的实验条件下可能会产生不同的表达结果。如果实验涉及到原代细胞、干细胞、部分悬浮细胞或者其它难以转化的样本的话,那么不确定性的扩大就会更加明显。##从客户的视角来看,转染最...
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在实验室购买电转仪的时候,价格当然是很重要的,但是如果我们把使用周期拉长到三年、五年甚至更长时间的话,就会发现仪器采购的价格只是一整个成本当中的一小部分。最容易被忽视的是设备使用后产生的隐形成本:参数一直不能优化出来,要不断地消耗细胞、试剂等;遇到难转染样本找不到合适的条件,项目的进度就会受到影响;出现异常电弧造成珍贵样品损坏的情况;设备的操作比较复杂,新成员要经过多次的培训;在做实验的时候遇到问题没有得到技术支持,只能靠研究者自己不断地尝试错误。因此对于科研人员以及企业的研...
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当电转实验由原来的“偶尔做几个样品”发展为现在的“每天处理几十个甚至更多的样品”的时候,实验人员对于电转仪的要求就会发生明显的改变。此时大家所关心的已经不是“能不能完成电转”了,而是在于每一个样品之间条件是否一致、操作是否顺畅、实验参数能否追溯,在长时间连续的工作中设备能否保持稳定。特别是在细胞治疗的研发、生物制药、基因编辑平台、分子育种等各个领域里,样品的价值通常都比较高。如果由于电弧、操作不当或者参数变化等原因导致整批样品全部报废,那么所造成的不仅仅是试剂费用的问题,还会...
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很多实验室在购买电穿孔仪的时候,最容易忽略的是不是性能的问题,而是在于未来几年应用扩展的问题。在最初的设备采购过程中,项目可能只进行哺乳动物细胞转染的工作;几个月后,课题组就开始做CRISPR基因编辑了;之后还会加入到实验中去的是细菌、酵母或者是植物原生质体实验。每次增加一个样本类型的时候,就必须要购买新的递送设备了,这样设备的投资就会不断地上升,实验室的空间、培训、维护和管理工作上的费用也会相应地提高。因此对于综合性实验室、公共技术平台和生物技术企业来说,电转仪的“兼容性”...
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很多实验室购买了电转仪之后都会遇到一个相同的问题:设备买回来之后,要真正建立起实验体系来,则需要不断地调节电压、脉冲时间、脉冲次数和细胞浓度。一个参数的变化就会造成转染效率和细胞存活率大相径庭的结果。特别是对于刚刚建立细胞转染平台的实验室而言,参数优化一般会伴随着大量的重复实验。一次实验所耗费的时间和精力是巨大的,而且还会用到很多珍贵的细胞、质粒、RNA、蛋白质样本以及各种配套试剂。如果持续几周乃至几个月都在进行“试参数”工作的话,那么整个项目的进度自然就会受到的影响。所以评...